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导语：
目前，免疫组化已成为病理鉴别诊断工作中的常规工具，但脾脏疾病免疫组化的判读依然令人摸不着北，本文为大家介绍了正常脾脏以及脾脏良恶性疾病免疫表型的最新知识，由于篇幅所限，将分为五期进行发布，希望对各位同仁日常工作有所帮助。
脾脏的组织学
为了正确判读脾脏的免疫组化结果，我们首先需要了解正常脾脏的组织学和功能，这也有助于我们在判断脾脏病变时去寻找到底是哪个部位发生了改变。
脾脏是造血和淋巴器官，发生于妊娠第五周胚胎的中胚层。首先，它是造血前体细胞的成熟部位；其次，它在免疫系统的发育中发挥作用。脾脏由红髓和白髓组成。红髓的功能主要是过滤血液，滤除异物、受损和衰老的红细胞；同时，它也是储存铁、红细胞和血小板的仓库。白髓充当血液中各种抗原免疫应答的发起者，使脾脏成为人体最大的次级淋巴器官。红髓和白髓包含的细胞种类不同，因此具有的免疫表型也不尽相同。脾脏还具有明显的间质和血管成分，它们在脾脏的生理和解剖结构中起作用，并且还可能出现异常增生。脾脏的红髓由脾索和静脉窦组成。脾索由网状肌纤维母细胞和巨噬细胞组成，脾窦内衬明显的内皮细胞，具有部分组织细胞功能，被称为窦岸细胞。在红髓内，肌纤维母细胞对平滑肌肌动蛋白（SMA）具有免疫反应性，并且巨噬细胞可表达巨噬细胞标记物（例如CD68和CD）染色。窦岸细胞是脾脏所特有的，因其具有独特的免疫表型，所以可通过标记它来识别异位脾脏。脾脏窦岸细胞表达血管内皮细胞标记物，例如CD31、WT1、VIII因子、ERG，CD68以及表达不定的CD21。而窦岸细胞最独特的标记物是CD8，通常与细胞毒性T细胞相关。窦岸细胞CD8的表达呈树突状的生长模式，进而显示出红髓的结构。CD8阳性说明脾脏的结构是完整的，相反，CD8的丢失则说明该脾脏原有结构已被肿瘤或其它占位性病变所取代。脾脏白髓由围绕淋巴细胞的小动脉组成，即所谓的动脉周围淋巴鞘（PALS）。PALS主要由T细胞和扁平的网状细胞组成。T细胞表达常见的T淋巴细胞抗原（CD2，CD3，CD5和CD7），大多数为CD4＋，对CD8表达很少。在小儿脾脏中，特别是在PALS中，也发现了散在的TDT＋（末端脱氧核苷酸转移酶阳性）细胞。脾脏的淋巴滤泡主要由B细胞组成，散在少量的CD4+T淋巴细胞。淋巴滤泡分为初级和次级滤泡。初级滤泡由表达标准的B淋巴细胞标记（CD19，CD20，CD79a，PAX5和BCL2）的成熟B细胞组成。次级滤泡由生发中心组成，生发中心含有B细胞和偶见的T淋巴细胞，以及被套区围绕的滤泡树突状细胞。生发中心的B淋巴细胞表达CD19、CD20、CD79a、PAX5，CD10和BCL6，并表达免疫球蛋白IgM和IgD。但是，它们对BCL2的表达呈阴性。套区B淋巴细胞表达CD19、CD20、CD5、DBA.44，BCL2和IgD，但CD10和CD23为阴性。组成滤泡网的滤泡树突状细胞表达滤泡树突状细胞标志物，例如CD21和CD35。边缘区位于红髓和白髓之间，该区富含巨噬细胞。边缘区B淋巴细胞具有特征性的IgM＋/IgD－的免疫表型;它们对B细胞标记物（CD19、CD20，CD22）呈阳性，并表达BCL2。边缘B区细胞对CD5、CD10，CD23和DBA.44呈阴性。此外，边缘区含有大量的SMA阳性肌纤维母细胞，SMA染色模式就像个边缘带，将白髓与红髓分隔开来。thrombomodulin染色也可突出显示这一现象。脾脏的免疫组化套餐基本项可以包括CD8，CD20，CD3和适当的血管标记物。该套餐通过比较CD20＋B细胞和CD3＋T细胞的数量，可以对白髓进行一些基本的表型分析。CD8对于确定脾脏的红髓结构是否完整至关重要（表1）。表1.脾脏免疫组化套餐脾脏基础免疫组化套餐：
CD3,CD8,CD20,CD34,ERG,WT1
红髓淋巴样病变：
CD8,CD68,CD34,DBA.44,annexinA1,BRAFVE,CD25,CD
白髓淋巴样病变：
CD20,CD3,CD5,CD10,BCL6,BCL1(cyclinD1),BCL2,Ki-67,MUM1,EBER,CD30,CD8
血管病变：
ERG,CD31,CD34,factorVIII,D2-40,CD68,CD,CD8,WT1
间质/组织细胞病变：
CD21,CD23,CD35,LMP1,EBER,SMA,S,ERG,CD31,CD34,WT1,CD68,CD,CD1a,CD3
T细胞或NK细胞淋巴瘤/白血病：
CD2,CD3,CD5,CD7,EBER,TIA1,granzymeB,TCL1,CD56,CD4,CD8,CD30
囊肿：
CD8,cytokeratinAE1/AE3,calretinin,GMSERG
血管标记物之间存在明显的优缺点。ERG是一种较新的标记物，具有多种优点，包括定位于细胞核（判读更容易）；染色强度和灵敏度极高（基本上所有的血管内皮和血管肿瘤均为阳性）。WT1也是一种出色的血管标记物，具有高灵敏度，背景着色干净和细胞质着色的特点，可染大多数血管内皮和血管肿瘤。CD34是一种非常好的血管标记物，但将CD34用于脾脏时，它不能鉴别脾脏的窦岸细胞（例如红髓窦）、血管增生（例如错构瘤）或源自窦岸细胞的肿瘤（窦岸细胞血管瘤）。CD34虽然可以在分化较差的血管源性肿瘤中表达，但大部分病例为阴性。CD31虽然对血管内皮敏感，但并不特异，因为它也会标记出巨噬细胞（表2）。VIII因子效果一般，仅具有中等敏感性和特异性（图1，A至O）。表2.脾脏中血管标记物比较
抗体
特异性
敏感性
特点
ERG
↑↑↑↑↑↑↑核阳性，标记血管内皮和血管肿瘤
WT1
↑↑↑↑↑↑胞质阳性，背景着色比CD34轻
CD34
↑↑↑↑↑不能标记脾脏窦岸细胞、脾脏错构瘤或窦岸细胞血管瘤
CD31
↑↑↑↑↑非特异性，也能标记组织细胞和巨噬细胞
VIII因子
↑↑↑↑二线抗体，较少使用，中等敏感性和特异性
↑↑表明特异性和/或敏感性较低；↑↑↑表示中度特异性和/或敏感性；↑↑↑↑表示特异性和/或敏感性最高。
图1正常脾脏的免疫表型。
图1A，白髓，显示生发中心和套区/边缘区；
图1B，CD20显示白髓B细胞阳性；
图1C，CD3在白髓的散在T细胞中表达。
图1D，Bcl-2在正常白髓的生发中心显示阴性，但通常边缘区/套区阳性；
图1E，CD43在正常白髓的T细胞中表达；
图1F，CD21突出了白髓中的滤泡树突网状结构；
图1G至M，红髓；
图1G，红髓显示脾窦；
图1H，VIII因子染内皮细胞；
图1I，CD8突出了脾窦结构；
图1J，CD68在组织细胞中显示阳性；
图1K，ERG标记内皮细胞；
图1L，CD34也标记内皮细胞；
图1M，WT1是非常敏感的内皮标记；
图1N和O，显示T区。N，小动脉周围淋巴鞘，周围有淋巴细胞；
图1O，CD4显示辅助T细胞。
流式细胞术
当对正常脾脏组织进行流式细胞术分析时，可能会遇到一些异常的淋巴细胞亚群。大约20％到30％的非肿瘤性脾脏B淋巴细胞表达CD5，在人类免疫缺陷病毒（HIV）和自身免疫性疾病中，这些CD5阳性的非肿瘤性B淋巴细胞数目可以增加。不应将这些非肿瘤性的B细胞与套细胞淋巴瘤或慢性淋巴细胞性白血病/小淋巴细胞淋巴瘤相混淆，后两者均表达CD5。少数CD4＋/CD8＋T细胞通常存在于正常脾脏中，其平均数量占T细胞的3.3％，最高达6％；通常CD4荧光着色明亮，而CD8荧光着色昏暗，不应将其误诊为T细胞淋巴母细胞性白血病/淋巴瘤。一些T细胞抗原可能会在脾T细胞中丢失，因此不要认为是肿瘤性的。脾脏中一部分正常T淋巴细胞不表达CD7。脾脏中γδT细胞的比例（12.5％±8.1％）高于外周血（4.0％±3.1％）；这些γδT细胞通常表达CD3，而不表达CD4，CD8和CD5。这些发现与αβT细胞群中的肿瘤形成有关，而与γδT细胞无关。有研究显示，大约有5%的脾脏T细胞为CD5－；这些细胞大多数是CD8＋或是γδT细胞。
脾脏中的自然杀伤（NK）细胞未成熟表型（CD56＋/CD16－）数量比外周血多。此外，CD2－的NK细胞在脾脏组织中构成重要的正常细胞亚群，虽然CD7表达被认为是NK细胞的特征，但脾脏中CD7的表达却很普遍。
尽管流式细胞术是一种很好的免疫分型方法，例如应用于淋巴瘤等，但对于脾脏病变（如血管增生或间质病变）需重点进行组织学切片检查，以评估脾脏结构和免疫组化的表达情况。
未完待续......
迈新相关抗体
抗体名称
产品编号
克隆号
阳性部位
CD3*
MAB-
MX
胞膜
CD3
Kit-
SP7
胞膜
CD8
RMA-
SP16胞膜CD8MAB-C8/B胞膜CD20
Kit-L26胞膜CD34Kit-QBEnd/10胞膜/胞质
ERG*?RMA-MXR胞核WT1*?MAB-MX胞核*标为迈新克隆产品
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